Pureza por HPLC en péptidos
La pureza de cada péptido de investigación de EXOMA se verifica por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) de fase reversa. El porcentaje exacto de cada lote queda documentado en su Certificado de Análisis (COA), que es el valor que se publica — no una cifra genérica de catálogo. Reactivos exclusivamente para investigación científica (RUO).
Metodología HPLC
Cómo se mide la pureza de un péptido, paso a paso. Protocolo de fase reversa basado en directrices USP y adaptado a péptidos sintéticos.
- Preparación de muestra — Disolución en fase móvil con filtración a 0.22 μm para eliminar partículas que interfieran con la lectura cromatográfica.
- Separación cromatográfica — Columna C18 de fase reversa (250 × 4.6 mm, 5 μm). Gradiente acetonitrilo/agua con TFA 0.1 %. Flujo 1.0 mL/min.
- Detección UV a 220 nm — Longitud de onda optimizada para el enlace peptídico. Inyección de 20 μL con detector de arreglo de diodos (DAD).
- Cálculo de pureza — Normalización de área: % pureza = (área del pico principal / área total) × 100. Se reportan todas las impurezas > 0.1 %.
¿Qué mide la HPLC?
La HPLC separa los componentes de una muestra según su afinidad por las fases estacionaria y móvil. El área del pico principal frente al área total de picos determina el porcentaje de pureza del péptido: cuanto mayor es ese porcentaje, menor es la proporción de impurezas o fragmentos de síntesis.
Nuestro estándar
- C18 — Columna de fase reversa.
- 220 nm — Detección UV.
- % por lote — La pureza medida se reporta en el COA.
- 1 lote = 1 COA — Trazabilidad.
Estándar de liberación y trazabilidad por lote
Cada lote se libera con su Certificado de Análisis, que indica la pureza medida por HPLC de ESE lote — no un valor genérico de catálogo. Si un lote no cumple la especificación de pureza indicada en su propio COA, se ofrece reemplazo o reembolso completo.
Verificación cruzada con espectrometría de masas
La HPLC cuantifica la pureza; la espectrometría de masas (MS) confirma que la masa molecular medida corresponde a la del péptido esperado. Ambas técnicas juntas validan identidad y pureza, no solo una de las dos.
El COA por lote es la fuente de verdad
El valor de pureza específico de cada lote está en su Certificado de Análisis, descargable y verificable por número de lote. Cada pedido incluye el COA correspondiente a los viales enviados.
Preguntas frecuentes
¿Qué es la pureza HPLC y por qué importa?
La HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) es el estándar analítico para cuantificar la pureza de un péptido. Una pureza ≥99% indica que al menos el 99% del contenido corresponde a la molécula objetivo, con menos del 1% de impurezas, subproductos de síntesis o degradación. Para investigación, mayor pureza significa resultados más reproducibles y menos variables confusas.
¿Cuál es la diferencia entre pureza ≥95% y ≥99%?
Un péptido al 95% contiene hasta 5% de impurezas: fragmentos truncados, aminoácidos residuales y sales. Al 99%, esas impurezas se reducen a menos del 1%, lo que se traduce en mayor precisión experimental y resultados más confiables en modelos in vitro e in vivo.
¿Cómo verifico la pureza de un péptido que compro?
El proveedor debe incluir un Certificado de Análisis (COA) con el cromatograma HPLC, donde se ve el pico principal y cualquier impureza detectada. Verifica que el COA sea específico del lote (número de lote) que recibiste y no un documento genérico del compuesto.
¿Qué estándares usa EXOMA para validar su pureza?
Cada lote se analiza por HPLC de fase reversa siguiendo protocolos derivados de la USP (United States Pharmacopeia). De forma complementaria se realiza espectrometría de masas (LC-MS) para confirmar la identidad molecular y ensayo de endotoxinas por método LAL.
¿La pureza se degrada con el tiempo?
Sí. Los péptidos liofilizados mantienen su pureza entre 24 y 36 meses a -20 °C. Una vez reconstituidos la degradación se acelera: almacena a 2-8 °C y usa el vial dentro de 21 a 30 días. La exposición a luz UV, el calor y los ciclos de congelación-descongelación son los principales factores de pérdida de integridad.